NK細(xì)胞分選試劑盒可用于從小鼠脾臟單細(xì)胞懸液中分離未經(jīng)標(biāo)記的NK 細(xì)胞。非NK細(xì)胞(T細(xì)胞、DC 細(xì)胞、B細(xì)胞、粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、紅系細(xì)胞)被生物素化的抗體和識(shí)別生物素的磁珠標(biāo)記通過(guò)去除這些非NK細(xì)胞，從而得到高純度的NK細(xì)胞。

其分選原理為：用生物素結(jié)合的單克隆抗體混合物(作為一級(jí)標(biāo)記試劑)和與磁珠結(jié)合的抗生物素單克隆抗體(作為二級(jí)標(biāo)記試劑)對(duì)非靶細(xì)胞進(jìn)行間接磁性標(biāo)記。磁性標(biāo)記的非目標(biāo)細(xì)胞在分選器的磁場(chǎng)中被保留在分選柱中，而未標(biāo)記的NK 細(xì)胞則通過(guò)分選柱流出。

試劑和儀器要求

緩沖液（pH7.2 PBS，0.5% BSA、2mM EDTA， 2~8℃）

分選柱和分選器。

(可選)熒光偶聯(lián)的抗體用于流式分析。

(可選)PI或7-AAD可以用于流式分析中排除死細(xì)胞。

(可選)死細(xì)胞清除試劑盒用于死細(xì)胞的清除。

(可選)預(yù)分離過(guò)濾器去除細(xì)胞團(tuán)塊。

操作步驟

一、樣本準(zhǔn)備

使用手動(dòng)方法或組織解離器制備脾臟單細(xì)胞懸液。

二、磁珠標(biāo)記

1.細(xì)胞計(jì)數(shù)。

2.300xg離心10分鐘。去除上清。

3.每107個(gè)細(xì)胞總量使用 40μL緩沖液重懸。

4.每107個(gè)細(xì)胞總量添加 10μLNK細(xì)胞生物素抗體混合物。

5.混勻，2-8℃孵育  5分鐘。

6.每107個(gè)細(xì)胞加入 2mL緩沖液洗滌細(xì)胞，300xg離心10分鐘，去上清。

7.每107個(gè)細(xì)胞添加 80μL 緩沖液。

8.每107個(gè)細(xì)胞添加 20μL抗生物素磁珠。

9.混勻，2-8℃孵育 10分鐘。

10.(可選)添加染色抗體。

11.進(jìn)行細(xì)胞分選步驟。

三、細(xì)胞分選

xM或xL分選柱進(jìn)行細(xì)胞分選

1.將分選柱置于相對(duì)應(yīng)的分選器中。

2.用適當(dāng)體積的緩沖液潤(rùn)洗分選柱（xM: 500 μL； xL: 3mL）

3.將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至分選柱中。收集含有未標(biāo)記細(xì)胞的流出液，即 NK細(xì)胞。

4.加適量的緩沖液，收集總流出物，并與步驟 3中的流出液混合，這是NK細(xì)胞。（ xM: 500 μL；xL: 3mL）

5.(可選 )將分選柱從分選器中取出，并將其放在合適的收集管上。加適量的緩沖液到分選柱中，迅速用塞子推下，得到就是磁性標(biāo)記的非NK細(xì)胞。（ xM: 1mL；xL: 5mL）

儲(chǔ)存溫度

2-8℃避光保存，請(qǐng)勿冷凍。有效期見(jiàn)試劑外標(biāo)簽。

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