動物細胞培養(yǎng)技術(shù)是生命科學(xué)研究中的重要工具，它為科學(xué)家們提供了一個體外模擬生物體內(nèi)細胞生長和分裂的環(huán)境。通過動物細胞培養(yǎng)，研究人員可以深入研究細胞的生理功能、代謝途徑以及疾病的發(fā)生機制，為人類的健康和福祉做出貢獻。本文將介紹動物細胞培養(yǎng)的程序和方案。
1. 生長條件
動物細胞培養(yǎng)需要使用比微生物生長所用的基本培養(yǎng)基更復(fù)雜、更具體的特定培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中重要的基本成分包括無機鹽、氮源、能量源、維生素、脂肪及脂溶性維生素、生長因子、激素等，有時還會添加pH緩沖系統(tǒng)、抗生素等。生長的溫度取決于細胞的來源，因為不同的生物體需要不同的溫度來生長和分裂。溫血動物細胞培養(yǎng)的最適溫度為37℃，冷血動物的生長溫度為15℃-25℃。
2. 原代細胞培養(yǎng)
原代細胞培養(yǎng)物是利用無菌剃刀從器官中取出的新鮮組織獲得的。在某些情況下，使用化學(xué)分解劑或蛋白水解酶去除細胞間質(zhì)。用緩沖液清洗獲得的細胞懸浮液以去除蛋白水解酶。將細胞懸浮液倒入平坦的表面上，可以是培養(yǎng)容器或無菌培養(yǎng)皿。將能夠粘附在容器底部的細胞覆蓋在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中并在室溫下孵育。
3. 細胞解凍
在隨后的傳代培養(yǎng)中，可能必須使用保存的細胞培養(yǎng)物。將水浴加熱至 37°C 的溫度，并對要接種細胞的生長培養(yǎng)基進行加熱。將溫?zé)岬呐囵B(yǎng)基加入培養(yǎng)容器中，然后將裝有冷凍細胞的瓶子放入水浴中直至解凍。解凍后，用 70% 酒精清洗孔的外部。將細胞懸浮液移入細胞培養(yǎng)容器中，輕輕旋轉(zhuǎn)以混合所有物質(zhì)。然后將培養(yǎng)基在通常的生長條件下培養(yǎng)過夜。第二天更換生長培養(yǎng)基。
4. 胰蛋白酶化細胞
胰蛋白酶消化是利用蛋白水解酶將粘附細胞從培養(yǎng)容器表面分離的方法。當(dāng)細胞要用于傳代、計數(shù)或其他目的時，就會進行此操作。除去培養(yǎng)基，回收細胞，然后用磷酸鹽緩沖液清洗細胞。將溫?zé)岬囊鹊鞍酌?/span>-EDTA加入到容器中，以覆蓋單層細胞。可以搖動容器以確保單層細胞被覆蓋。將容器放入 37°C 的 CO2 培養(yǎng)箱中孵育1-3分鐘。將容器從培養(yǎng)箱中取出，用手掌用力敲擊燒瓶的側(cè)面，以幫助分離。一旦細胞被移除，它們就會被重新懸浮在含有一定量血清的適當(dāng)生長培養(yǎng)基中。然后借助注射器針頭，通過破壞細胞團塊來分離細胞，并進行相應(yīng)使用。
5. 傳代培養(yǎng)
傳代培養(yǎng)是指將原代培養(yǎng)的細胞從培養(yǎng)容器表面分離下來，重新接種在新的培養(yǎng)基中，使其繼續(xù)生長和分裂的過程。傳代培養(yǎng)是動物細胞培養(yǎng)中非常重要的一步，它使得研究人員能夠獲得大量的細胞用于后續(xù)的實驗研究。
6. 細胞凍存
為了長期保存細胞，研究人員需要將細胞進行凍存。細胞凍存是將細胞置于特定的凍存液中，然后通過降溫的方式使細胞進入休眠狀態(tài)，從而在低溫條件下長期保存細胞。凍存后的細胞可以在需要時進行解凍和復(fù)蘇，繼續(xù)進行培養(yǎng)和實驗研究。
7. 細胞分選和純化
在動物細胞培養(yǎng)過程中，為了獲得具有特定表型的細胞群體，研究人員需要進行細胞分選和純化。細胞分選是通過特定的方法將細胞按照其表型或功能進行分離的過程。而細胞純化則是將細胞分選后得到的細胞群體進一步純化，以獲得更純凈的細胞亞群。
蘇州阿爾法生物作為楚怡發(fā)酵罐制造聯(lián)盟供應(yīng)商持續(xù)為客戶提供微生物發(fā)酵罐 、細胞生物反應(yīng)器、玻璃生物反應(yīng)器、一次性生物反應(yīng)器、細胞貼壁培養(yǎng)生物反應(yīng)器、不銹鋼發(fā)酵罐等中小型發(fā)酵設(shè)備，這些實驗室儀器 廣泛應(yīng)用于細胞規(guī)模擴增，疫苗生產(chǎn)、新藥開發(fā)、生物合成、發(fā)酵工程等領(lǐng)域。
同時公司可承接定制200L以上發(fā)酵工程所用的發(fā)酵罐及發(fā)酵設(shè)備，目前華東地區(qū)市場累計用戶超530+，行業(yè)滿意率達 96.5%以上。
蘇州阿爾法生物還同時提供以下產(chǎn)品與服務(wù)：
HyCyte™ 干細胞、原代細胞、CHO細胞、HEK29細胞，細胞生長因子,基質(zhì)膠，三系誘導(dǎo)培養(yǎng)試劑、細胞培養(yǎng)基、基因編輯試劑盒、基因編輯細胞，細胞株現(xiàn)貨、細胞專用血清等細胞生物學(xué)試劑。
提供的服務(wù)包括：CRISPR-Cas9細胞基因編輯、載體構(gòu)建,病毒包裝,分子量標(biāo)準(zhǔn)品，突變基因標(biāo)準(zhǔn)品，融合基因標(biāo)準(zhǔn)品，細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)，細胞干擾等服務(wù)。
如需了解更多動物細胞培養(yǎng)請進入蘇州阿爾法生物。
