瓊脂糖核酸電泳步驟
1. 用蒸餾水將制膠模具和梳子沖洗干凈， 放在制膠平板上， 封閉模具邊緣， 架好梳子；
2. 根據(jù)欲分離 DNA 片段大小用凝膠緩沖液配制適宜濃度的瓊脂糖凝膠：準確 稱量瓊脂糖干粉， 加入到配膠用的三角燒瓶內(nèi)， 定量加入電泳緩沖液（一般
20~30 ml）；
3. 放入到微波爐內(nèi)加熱熔化。冷卻片刻， 加入一滴熒光染料，輕輕旋轉(zhuǎn)以充分
混勻凝膠溶液，倒入電泳槽中，待其凝固；
4. 室溫下 30~45 分鐘后凝膠全凝結(jié)， 小心拔出梳子， 將凝膠安放在電泳槽內(nèi)；
5. 向電泳槽中倒入電泳緩沖液，其量以沒過膠面 1mm 為宜，如樣品孔內(nèi)有氣
泡，應設(shè)法除去；
6. 在 DNA 樣品中加入 10×體積的載樣緩沖液（loading buffer），混勻后，用槍
將樣品混合液緩慢加入被浸沒的凝膠加樣孔內(nèi)；
7. 接通電源， 紅色為正極，黑色為負極， 切記 DNA 樣品由負極往正極泳動 (靠
近加樣孔的一端為負)。一般 60 ～ 100V 電壓，電泳 20 ～ 40min 即可；
8. 根據(jù)指示劑泳動的位置，判斷是否終止電泳；
9. 電泳完畢， 關(guān)上電源， 在凝膠成像儀上觀察電泳帶及其位置，并與核酸分子
量標準 Marker 比較被擴增產(chǎn)物的大小。
| 瓊脂糖凝膠濃度與線形 DNA 的最佳分辨范圍 | |
| 瓊脂糖凝膠濃度 | 線形 DNA 的最佳分辨范圍（bp） |
| 0.5% | 1,000 ～ 30,000 |
| 0.7% | 800 ～ 12,000 |
| 1.0% | 500 ～ 10,000 |
| 1.2% | 400 ～ 7,000 |
| 1.5% | 200 ～ 3,000 |
| 2.0% | 50 ～ 2,000 |
膠回收純化 DNA
1. 瓊脂糖電泳，將特異電泳帶用刀切下放入到 EP 管中，稱瓊脂糖帶的重量；
2. 按照每 100mg 加 400µl 的量加入binding buffer，放入到 EP 管振蕩器中，45℃ ~
55℃溫育振蕩，直到所有的瓊脂糖都溶解（大概要 5 分鐘 ）；
3. 取出純化柱， 將上述溶解液轉(zhuǎn)移至柱中， 室溫下放置 2 分鐘， 8,000rpm 離心
1 分鐘，棄 EP 管中的液體，將純化柱放回 EP 管中；
4. 加 500µl 的 wash buffer 至柱中， 8,000rpm 離心 1 分鐘。棄管中的溶液；
5. 重復操作 4 步的操作 1 次，最后將純化柱放入 EP 管中 10,000rpm 離心 30 秒，
除去痕量的 wash buffer；
6. 將純化柱放入一個新的 EP 管。加 30~40µl H2O 或者 elution buffer 至純化柱膜 的中央，在37℃或 50℃下放置 2 分鐘， 10,000rpm 離心 1 分鐘洗脫 DNA，將
EP 管中的 DNA 溶液放在-20℃保存。
7. 注： 若想要不電泳而直接純化 DNA 溶液， 只需要在第 2 步中按 100µl 液量加 400µl 的 binding buffer,其余的步驟不變。
